A insulina humana foi a primeira droga oficialmente produzida utilizando a tecnologia do DNA recombinante, em 1978. Em 1979, foi a vez do hormônio de crescimento (GH). Atualmente existem mais de 300 biofármacos disponíveis no mercado, incluindo proteínas terapêuticas e anticorpos, e as vendas já superam os 100 bilhões de dólares. Dados de 2003 a 2014 mostram que a maior parte dos biofármacos aprovados por agências reguladoras americanas e europeias eram derivados de células de mamíferos (56%), E. coli (24%), S. Cerevisae (13%); animais transgênicos, plantas (3%) e células de inseto (4%). A insulina é prioritariamente produzida em E. coli e em S. cerevisae para o tratamento de indivíduos diabéticos. Para que a produção de insulina fosse possível algumas etapas relacionadas a clonagem foram necessárias. As sentenças abaixo enumeram algumas dessas etapas, entretanto nem todas são verdadeiras: 1. Identificar o gene de interesse e extraí-lo de uma célula eucariótica. 2. Isolar o plasmídeo da célula bacteriana. 3. Isolar o plasmídeo da célula eucariótica. 4. Clivar o gene e o plasmídeo com a mesma enzima de restrição. 5. Clivar o gene e o plasmídeo com enzimas de restrição diferentes. 6. Unir o plasmídeo e o gene usando enzimas de restrição. 7. Unir o plasmídeo e o gene usando DNA ligase. 8. Inserir o DNA recombinante na bactéria pelo processo de transformação. 9. Inserir o DNA recombinante na bactéria pelo processo de transdução. 10. Isola-se o gene da insulina produzida pela bactéria para tratar o paciente. 11. Purifica-se a proteína produzida pela bactéria e ela será usada para tratar o paciente. Assinale a alternativa que apresenta, na ordem correta, as etapas verdadeiras e necessárias para a produção da insulina humana: Escolha uma: